Préparation bleu de toluidine en solution

[Marion92]

Bonjour à tous,

J'ai quelques questions à propos du TP mitose pour les premières spécialités SVT.

Comment préparer le bleu de toluidine en solution? A quelle concentration?

J'ai vu qu'on pouvait aussi utiliser une solution d'orcéine. J'ai un solution d'orcéine B toute faite de Jeulin et apparemment il y a une étape de fixation avant d'utiliser la solution B alors que la solution d'orcéine A fixe et colore.

Avant l'étape de la coloration, il faut tremper l'échantillon dans de l'acide chlorhydrique. Pouvez-vous me dire à quoi sert cette étape et à quelle concentration faire cette solution de HCl?

Merci d'avance 

[Labo 75]

Bonjour Aurélie87,
Didier Pol nous dit (dans son livre référence, épuisé, "Travaux pratiques de biologie", ed Bordas):
Bleu de toluidine: 1g/L dans tampon acétate pH 4,6.
Ce TP a eu lieu aujourd'hui, les résultats sont médiocres, même au labo... Penser à bien rincer à l'eau distillée pour éclaircir la préparation.

Les résultats sont bien meilleurs avec l'orcéine, on fera d'ailleurs comme ça demain.
Préparation (D. Pol, encore!):
Solution mère:
1g dans 45mL d'acide acétique pur.
Faire bouillir (sous hotte!), laisser refroidir et filtrer.
Solution diluée:
9mL de solution dans 11mL d'eau distillée
Conserver au réfrigérateur (nous laisser à température ambiante, pas de problème chez nous)

Avant la coloration on met une goutte d'HCl 1 mole sur l'échantillon pendant qq minutes. Je pense que cela permet le ramollissement des parois cellulaires et facilite la pénétration du colorant ensuite.
Après coloration bien rincer à l'eau distillée (à faire en générale pour toutes les colorations).

[Marion92]

Merci pour votre réponse. Je vais tester tout ça.